酶联免疫检测的几种方法及其原理

来源:学生作业帮助网 编辑:作业帮 时间:2024/06/10 02:00:30
酶联免疫检测的几种方法及其原理
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酶联免疫检测的几种方法及其原理
酶联免疫检测的几种方法及其原理

酶联免疫检测的几种方法及其原理
(1)酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA):是将抗原或抗体吸附在固相载体表面.使抗原抗体反应在固相载体表面进行.可用间接法、双抗体夹心法或竞争法测定抗原或抗体.
(2)夹心法(sandwich assay):将已知的特异抗体包装在固相载体(塑料板凹孔或纸片上),加入待检标本,标本中的抗原即可与载体上的抗原结合,洗去未结合的材料后加入该抗原的酶标记抗体,洗去未结合的酶标抗体,加底物显色,用酶免疫检测仪测量颜色的光密度,可定量测定抗原.
  间接法(indirecr ELISA)常用于检查特异抗体.先将已知特异抗原包被固相载体,加入待检标本(可能含有相应抗体),再加入酶标抗Ig的抗全(即第二抗体),经加底物显色后,根据颜色的光密度计算出标本中抗体的含量.
(3)BAS-ELISA:近年来对酶免设分析法的改进是使用生物素-亲合素-过氧化物酶复合物作为指示剂,组成一新的生物放大系统进一步提高检测的敏感度.可用来检测多种抗原抗体系统如细菌、病毒、肿瘤细胞表面抗原等.一个亲合素(avidin)分子可以结合4个生物素分子(biotin).结合非常稳定.亲合素和生物素都可与抗全、酶、荧光素等分子结合,而不影响后者的生物活性.一个抗体分子可偶联90个生物素分子,通过生物素又可连接多个亲合素.因此大提高检测的敏感度.目前应用生物-酶标亲合素系统(biotinavidin system- ELISA,BAS-ELISA),它是通过生物素标记抗体连接免疫反应系统,同时借助生物素化酶或酶标亲合素引入酶与底物反应系统.